抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定

Development and characterization of monoclonal antibody against Vibrio harveyi lipopolysaccharide

摘要:

以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9.该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1:1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应.用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F 9识别LPS的类脂A抗原.用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量.

关键词:哈维氏弧菌;脂多糖;间接ELISA;单克隆抗体;免疫印迹;抑制ELISA;交叉反应;哈维氏弧菌;脂多糖;单克隆抗体;lipopolysaccharide;Vibrio harveyi;monoclonal antibody;characterization;剂量;鱼类;释放量;培养;定量检测;抗原;类脂;免疫识别;免疫印迹;免疫交叉反应;处理;高碘酸氧化法;嗜水气单胞菌

Abstract:

Key words:哈维氏弧菌;脂多糖;间接ELISA;单克隆抗体;免疫印迹;抑制ELISA;交叉反应;哈维氏弧菌;脂多糖;单克隆抗体;lipopolysaccharide;Vibrio harveyi;monoclonal antibody;characterization;剂量;鱼类;释放量;培养;定量检测;抗原;类脂;免疫识别;免疫印迹;免疫交叉反应;处理;高碘酸氧化法;嗜水气单胞菌